一、色譜圖和峰參數(shù)
⑴色譜圖(chromatogram)--樣品流經(jīng)色譜柱和檢測(cè)器,所得到的信號(hào)-時(shí)間曲線,又稱色譜流出曲線(elutionprofile).
⑵基線(baseline)--流動(dòng)相沖洗,柱與流動(dòng)相達(dá)到平衡后,檢測(cè)器測(cè)出一段時(shí)間的流出曲線。一般應(yīng)平行于時(shí)間軸。
⑶噪音(noise)――基線信號(hào)的波動(dòng)。通常因電源接觸不良或瞬時(shí)過(guò)載、檢測(cè)器不穩(wěn)定、流動(dòng)相含有氣泡或色譜柱被污染所致。
⑷漂移(drift)基線隨時(shí)間的緩緩變化。主要由于操作條件如電壓、溫度、流動(dòng)相及流量的不穩(wěn)定所引起,柱內(nèi)的污染物或固定相不斷被洗脫下來(lái)也會(huì)產(chǎn)生漂移。
⑸色譜峰(peak)--組分流經(jīng)檢測(cè)器時(shí)相應(yīng)的連續(xù)信號(hào)產(chǎn)生的曲線。流出曲線上的突起部分。正常色譜峰近似于對(duì)稱性正態(tài)分布曲線(高斯Gauss曲線)。不對(duì)稱色譜峰有兩種:前延峰(leadingpeak)和脫尾峰(tailingpeak).前者少見(jiàn)。
⑹拖尾因子(tailingfactor,T)--T=B/A,用以衡量色譜峰的對(duì)稱性。也稱為對(duì)稱因子(symmetryfactor)或不對(duì)稱因子(asymmetryfactor)《中國(guó)藥典》規(guī)定T應(yīng)為0.95~1.05。T<0.95為前延峰,T>1.05為拖尾峰。
⑺峰底――基線上峰的起點(diǎn)至終點(diǎn)的距離。
⑻峰高(Peakheight,h)――峰的zui高點(diǎn)至峰底的距離。
⑼峰寬(peakwidth,W)--峰兩側(cè)拐點(diǎn)處所作兩條切線與基線的兩個(gè)交點(diǎn)間的距離。W=4σ。
⑽半峰寬(peakwidthathalf-height,Wh/2)--峰高一半處的峰寬。Wh/2=2.355σ。
⑾標(biāo)準(zhǔn)偏差(standarddeviation,σ)--正態(tài)分布曲線x=±1時(shí)(拐點(diǎn))的峰寬之半。正常峰寬的拐點(diǎn)在峰高的0.607倍處。標(biāo)準(zhǔn)偏差的大小說(shuō)明組分在流出色譜柱過(guò)程中的分散程度。σ小,分散程度小、極點(diǎn)濃度高、峰形瘦、柱效高;反之,σ大,峰形胖、柱效低。
⑿峰面積(peakarea,A)――峰與峰底所包圍的面積。A=×σ×h=2.507σh=1.064Wh/2h
二、定性參數(shù)(保留值)
⑴死時(shí)間(deadtime,t0)--不保留組分的保留時(shí)間。即流動(dòng)相(溶劑)通過(guò)色譜柱的時(shí)間。在反相HPLC中可用苯磺酸鈉來(lái)測(cè)定死時(shí)間。
⑵死體積(deadvolume,V0)――由進(jìn)樣器進(jìn)樣口到檢測(cè)器流動(dòng)池未被固定相所占據(jù)的空間。它包括4部分:進(jìn)樣器至色譜柱管路體積、柱內(nèi)固定相顆粒間隙(被流動(dòng)相占據(jù),Vm)、柱出口管路體積、檢測(cè)器流動(dòng)池體積。其中只有Vm參與色譜平衡過(guò)程,其他3部粉只起峰擴(kuò)展作用。為防止峰擴(kuò)展,這3部分體積應(yīng)盡量減小。V0=F×t0(F為流速)
⑶保留時(shí)間(retentiontime,tR)--從進(jìn)樣開(kāi)始到某個(gè)組分在柱后出現(xiàn)濃度極大值的時(shí)間。
⑷保留體積(retentionvolume,VR)--從進(jìn)樣開(kāi)始到某個(gè)組分在柱后出現(xiàn)濃度極大值時(shí)流出溶劑的體積。又稱洗脫體積。VR=F*tR.
⑸調(diào)整保留時(shí)間(adjustedretentiontime,tR’)--扣除死時(shí)間后的保留時(shí)間。也稱折合保留時(shí)間(red?retentiontime)。在實(shí)驗(yàn)條件(溫度、固定相等)一定時(shí),tR’只決定于組分的性質(zhì),因此,tR’(或tR)可用于定性。TR’=tR-t0
⑹調(diào)整保留體積(adjustedretentionvolume,VR’)--扣除死體積后的保留體積。VR=VR-V0或VR=F*tR’
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